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        大鼠叉頭框蛋白01(FoxO1)ELISA試劑盒說明書

        發(fā)布時間:2024-08-21
        大鼠叉頭框蛋白01(foxo1)酶聯(lián)免疫分析試劑盒使用說明書
        本試劑盒僅供研究使用。
        檢測范圍: 96t
        0.6ng/l - 30ng/l
        大鼠叉頭框蛋白01(foxo1)elisa試劑盒說明書使用目的 : 本試劑盒用于測定大鼠血清、血漿及相關液體樣本中叉頭框蛋白 01(foxo1)含。 實驗原理 實驗原理 實驗原理 實驗原理 本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中大鼠叉頭框蛋白 01(foxo1)水平。用純化的大 鼠叉頭框蛋白 01(foxo1)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入 叉頭框蛋白 01(foxo1),再與 hrp 標記的叉頭框蛋白 01(foxo1)抗體結合,形成抗體抗原-酶標抗體復合物,過*洗滌后加底物 tmb 顯色。tmb 在 hrp 酶的催化下轉化成 藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的叉頭框蛋白 01(foxo1) 呈正相關。用酶標儀在 450nm 波長下測定吸光度(od 值),通過標準曲線計算樣品中大鼠 叉頭框蛋白 01(foxo1)濃度。
        試劑盒組成 1 30 倍濃縮洗滌液 20ml×1 瓶 7 終止液 6ml×1 瓶 2 酶標試劑 6ml×1 瓶 8 標準品(48ng/l) 0.5ml×1 瓶 3 酶標包被板 12 孔×8 條 9 標準品稀釋液 1.5ml×1 瓶 4 樣品稀釋液 6ml×1 瓶 10 說明書 1 份 5 顯色劑 a 液 6ml×1 瓶 11 封板膜 2 張 6 顯色劑 b 液 6ml×1/瓶 12 密封袋 1 個 標本 標本 標本 標本要求 要求 要求 要求 1.標本采集后盡早進行提取,提取按相關文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能 馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融 2.不能檢測含 nan3 的樣品,因 nan3 抑制辣根過氧化物酶的(hrp)活性。
        操作步驟 1. 標準品的稀釋:本試劑盒提供原倍標準品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀 釋。 24ng/l 5 號標準品 150µl 的原倍標準品加入 150µl 標準品稀釋液 12ng/l 4 號標準品 150µl 的 5 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 6ng/l 3 號標準品 150µl 的 4 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 3ng/l 2 號標準品 150µl 的 3 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液 1.5ng/l 1 號標準品 150µl 的 2 號標準品加入 150µl 標準品稀釋液
        2.加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準孔、
        待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣 50µl,待測樣品孔中先加樣品稀釋液 40µl, 然后再加待測樣品 10µl(樣品zui終稀釋度為 5 倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡 不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
        3.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
        4.配液:將 30 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 30 倍稀釋后備用
        5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此 重復 5 次,拍干。
        6.加酶:孔加入酶標試劑 50µl,空白孔除外。
        7.溫育:操作同 3。
        8.洗滌:操作同 5。
        9.顯色:孔先加入顯色劑 a50µl,再加入顯色劑 b50µl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色 15 分鐘.
        10.終止:孔加終止液 50µl,終止反應(此時藍色立轉黃色)。
        11.測定:以空白空調(diào)零,450nm 波長依序測各孔的吸光度(od 值)。 測定應在加終止 液后 15 分鐘以內(nèi)進行。 操作程序總結 操作程序總結 操作程序總結 操作程序總結: :: :
        計算
        以標準物的濃度為橫坐標,od 值為縱坐標,在坐標紙上繪出標準曲線,根據(jù)樣品的 od 值由標準曲線查出相應的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標準物的濃度與 od 值計算出標
        準曲線的直線回歸方程式,將樣品的 od 值代入方程式,計算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù), 即為樣品的實際濃度。 注意事項 注意事項 注意事項 注意事項 1.試劑盒從冷環(huán)境中取出應在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標包被板開封后如未 用完,板條應裝入密封袋中保存。 2.濃洗滌液可能會有結晶析出,稀釋時可在水浴中加溫助溶,洗滌時不影響結果。 3.各步加樣均應使用加樣器,并常校對其準確性,以避免試驗誤差。一次加樣時間 控制在 5 分鐘內(nèi),如標本數(shù)多,推薦使用排槍加樣。 4. 請次測定的同時做標準曲線,做復孔。如標本中待測物質(zhì)含過高(樣本 od 值 大于標準品孔*孔的 od 值),請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n 倍)后再測定,計 算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n×5)。 5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。 6.底物請避光保存。 7.嚴格按照說明書的操作進行,試驗結果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準. 8.所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理。 9.本試劑不同批號組分不得混用。
        保存條件及有效期 1.試劑盒保存:;2-8℃。
        2.有效期:6 個月
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