細(xì)胞株保存方法
1、需要*保存的細(xì)胞株必須儲(chǔ)存于-20℃ - 70℃ 低溫冰箱中。4℃冰箱中保存時(shí)間切勿超過1個(gè)月。切勿將細(xì)胞株在 37℃放置太久,否則細(xì)胞株會(huì)變得渾濁,同時(shí)細(xì)胞株中的有效成分會(huì)被破壞，而影響細(xì)胞株質(zhì)量。如果一次無法用完一瓶,可 將40～45ml分裝于無菌50ml離心管中。由于細(xì)胞株結(jié)冰時(shí)體積會(huì)增加約10%,因此,細(xì)胞株在凍入低溫冰箱前，必須預(yù)留一 定體積空間,否則易發(fā)生污染或玻璃瓶凍裂。
2、一般廠商提供的細(xì)胞株為無菌,無需再過濾除菌。如發(fā)現(xiàn)細(xì)胞株有懸浮物,則可將細(xì)胞株加入培養(yǎng)液內(nèi)一起過濾,切勿直接 過濾細(xì)胞株。
3、瓶裝細(xì)胞株解凍需采用逐步解凍法:-20℃ 至 -70℃ 低溫冰箱中的細(xì)胞株放入4℃冰箱中溶解1天.然后移入室溫,待全 部溶解后再分裝,一般以50ml無菌離心管可分裝40～45ml。在溶解過程中須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度 與成分均一,減少沈淀的發(fā)生。.切勿直接將細(xì)胞株從-20℃進(jìn)入37℃解凍,這樣因溫度改變太大,容易造成蛋白質(zhì)凝集而 出現(xiàn)沉淀。
4、熱滅活是指56℃, 30分鐘加熱已*解凍的細(xì)胞株.加熱過程中須規(guī)則搖晃均勻.此熱處理的目的是使細(xì)胞株中的補(bǔ)體 成分滅活.除非必須,一般不建議作此熱處理,因?yàn)闊崽幚頃?huì)造成細(xì)胞株沉淀物顯著增多,而且還會(huì)影響細(xì)胞株的質(zhì)量.補(bǔ)體 參與反應(yīng)有:細(xì)胞毒作用, 平滑肌細(xì)胞收縮, 肥大細(xì)胞和血小板釋放組胺, 增強(qiáng)吞噬作用, 促進(jìn)淋巴細(xì)胞和巨噬細(xì)胞 發(fā)生化學(xué)趨化和活化。
5、細(xì)胞株中的沉淀物 絮狀物:主要是細(xì)胞株中的脂蛋白變性及解凍后細(xì)胞株中纖維蛋白造成,這些絮狀物不會(huì)影響細(xì)胞株本身 的質(zhì)量.可用離心3000rpm,5分鐘去除,也可不用處理。 顯微鏡下小黑點(diǎn):經(jīng)過熱處理過的細(xì)胞株,沉淀物 的形成會(huì)顯著增多。有些沉淀物在顯微鏡下觀察象小黑點(diǎn),常誤認(rèn)為細(xì)胞株受污染。一般情況下,此小黑 點(diǎn)不會(huì)影響細(xì)胞生長,但如果懷疑細(xì)胞株質(zhì)量,則應(yīng)立即停止使用,更換另一批號(hào)的細(xì)胞株。