pcr全稱為聚合酶鏈式反應,是一種用于放大擴增特定的dna片段的分子生物學技術。
標準的pcr過程分為三步:
第一步,dna變性(90℃-96℃)雙鏈dna在高溫作用下,氫鍵斷裂,形成單鏈dna。
模板dna經(jīng)加熱至94℃左右一定時間后,使模板dna雙鏈或經(jīng)pcr擴增形成的雙鏈dna解離,使之成為單鏈,以便它與引物結合,為下輪反應做準備;
第二步,退火(60℃-65℃)溫度降低,引物與dna模板結合,形成局部雙鏈。
模板dna與引物的退火(復性):模板dna經(jīng)加熱變性成單鏈后,溫度降至55℃左右,引物與模板dna單鏈的互補序列配對結合;
第三步,延伸(70℃-75℃)在taq酶的作用下,以dntp為原料,從引物的3′端開始以從5′到3′端的方向延伸,合成與模板互補的dna鏈。
dna模板--引物結合物在taq酶的作用下,以dntp為反應原料,靶序列為模板,按堿基配對與半保留復制原理,合成一條新的與模板dna 鏈互補的半保留復制鏈。
重復循環(huán)變性--退火--延伸三過程,就可獲得更多的“半保留復制鏈”,而且這種新鏈又可成為下次循環(huán)的模板。每完成一個循環(huán)需2~4分鐘, 2~3小時就能將待擴目的基因擴增放大幾百萬倍。