sfre 199,是對m199培養(yǎng)基的改良型,初研發(fā)是為了生長和維持培養(yǎng)bak細(xì)胞(原代狒狒腎細(xì)胞)。sfre 199分為i型和ii型,即sfre 199-1和sfre 199-2。
sfre 199與m199的不同點(diǎn)在于升高了8種氨基酸(*-鹽酸、半*、*、l -*、l -*、*、*、*)和葡萄糖的濃度,并加入硫酸鋅、丙酮酸鈉和*鋅胰島素。另外,還降低了硝酸鐵、黃嘌呤和*的濃度。sfre 199-1與sfre 199-2的不同在于,前者含有hank's鹽,而后者所含為earle's鹽。
sfre-199將m199標(biāo)準(zhǔn)配方中的*增加到150mg/l,半*增至4mg/l,*增至40mg/l,*增至300mg/l,*增至75mg/l,*增至100mg/l,*增至40mg/l,*增至80mg/l,以獲得大的細(xì)胞生長而未表現(xiàn)出毒性。與加胎牛血清的常規(guī)培養(yǎng)基比較,細(xì)胞生長速率、產(chǎn)量和蛋白容量均相同。均在移植后第6天單層細(xì)胞達(dá)到充分融合。
有報(bào)道,在sfre 199-1生長的原代bak細(xì)胞的群體二倍分裂時(shí)間(pdt)約為34.2小時(shí),與加有5%牛血清的hlh(含水解乳白蛋白的hbss)相同,加有3%胎牛血清的m199的pdt為36小時(shí)。如果在sfre 199-1中去除胰島素或硫酸鋅,則細(xì)胞不能融合,pdt延長。若含有胰島素和硫酸鋅,則其支持生長的能力相當(dāng)于標(biāo)準(zhǔn)對照血清培養(yǎng)基。
sfre 199培養(yǎng)基中除了葡萄糖,還添加了半乳糖,以避免乳酸過度積累。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),添加的d(+)—半乳糖1000mg/l,可使乳酸合成降低54.5%,在21天的觀察期間培養(yǎng)基的ph保持穩(wěn)定(7.3-7.4)。若培養(yǎng)基ph降到6.8,則培養(yǎng)很難維持。
himedia公司生產(chǎn)的sfre 199培養(yǎng)基不含胰島素和*,需在使用前單獨(dú)添加。建議用1n hcl或1n naoh將ph調(diào)低理想ph值的0.2-0.3個(gè)ph單位,因?yàn)檫^濾會使ph值略微升高。根據(jù)需要,還可以無菌添加其他成分,以保證個(gè)性培養(yǎng)基的優(yōu)化。
sfre 199培養(yǎng)基有多種應(yīng)用。除培養(yǎng)bak細(xì)胞外,有報(bào)道用不加血清的sfre-199-2培養(yǎng)牛輸卵管峽部上皮細(xì)胞和壺腹上皮細(xì)胞,體外研究牛的受孕過程。也有報(bào)道用sfre 199-1無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)vero細(xì)胞效果較優(yōu)。而vero細(xì)胞常用于狂犬病疫苗,乙腦疫苗等的生產(chǎn)。因此,sfre 199培養(yǎng)基具有*的作為無血清培養(yǎng)基用于疫苗生產(chǎn)的潛力。
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