溫和氣單胞菌pcr試劑盒pcr反應條件設置:
a)預變性:95℃,5 min可以讓白細胞裂解,釋放可用于pcr擴增的基因組dna。請勿縮短時間或降低溫度。
b)退火溫度:退火溫度設置為引物tm值即可。然而,使用高的退火溫度可以有效減少非特異性擴增,并提高全血模板的擴增效率。因此,如擴增產物特異性較差,可以建立一個溫度梯度反應去尋找引物模板適退火溫度。
c)延伸時間:按30 sec/kb設定,如不足30 sec,設置30 sec即可。
d)擴增循環(huán)數:35個循環(huán)已可以擴增足量產物。太多的循環(huán)將會導致非特異性擴增增加。
3. 擴增產物分析