het-1a 人食管上皮細(xì)胞
human esophageal normal cells ,het1a
貨號(hào)：yj-h333（str鑒定）
價(jià)格： 3000.0
規(guī)格： 1*106
細(xì)胞介紹
het-1a 細(xì)胞系于 1986 年通過(guò)用由 rsv-ltr 啟動(dòng)子和編碼猿猴病毒 40 大 t 抗原的序列組成的質(zhì)粒 prsv-t 轉(zhuǎn)染從人食管尸檢組織中衍生而來(lái)。生長(zhǎng)因子研究表明，het-1a 受鈣刺激，受胎牛血清、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1 和轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β2 抑制。
伏馬菌素 b1 可抑制 het-1a 細(xì)胞的生長(zhǎng)并增加細(xì)胞凋亡。合成類(lèi)視黃醇 cd437（6-[3-(1-金剛烷基)-4-羥基苯基]-2-萘甲酸 (ahpn/cd437)0）通過(guò) caspase-3 依賴(lài)途徑誘導(dǎo)食管鱗狀 het-1a 細(xì)胞凋亡。細(xì)胞核型位亞二倍體（34-40 條染色體），可用于研究假定的食道致癌物的作用。
細(xì)胞特性
1）來(lái)源：黑人 男性 25歲 食管
2）形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)
3）含量：>1x10^6細(xì)胞數(shù)
4）規(guī)格：t25瓶或者1ml凍存管包裝
5)用途：僅供科研使用。
運(yùn)輸和保存
干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞
（1）1ml凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
（2）t25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。
細(xì)胞接收后的處理
1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將t25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。
2）請(qǐng)?jiān)?或5x顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀(guān)照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。
3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀(guān)察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8ml，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。
4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。收到細(xì)胞后第一次傳代建議t25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。
細(xì)胞培養(yǎng)步驟
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1）準(zhǔn)備begm kit培養(yǎng)基 (lonza/clonetics，cc-3170)備注：培養(yǎng)基包含（a+b）
a： bebm 基礎(chǔ)培養(yǎng)基 （貨號(hào)cc-3171） 500ml
b: 細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑 （貨號(hào)cc-4175） 一套（包含下列試劑）
● bpe, 2.0 ml ● hydrocortisone, 0.5 ml ● hegf, 0.5 ml
● epinephrine, 0.5ml ● insulin,0.5 ml ● transferrin, 0.5 ml
● triiodothyronine, 0.5 ml ● retinoic acid, 0.5 ml ● ga, 0.5ml
atcc 不使用 begm 試劑盒提供的 ga-1000（慶大霉素-兩性霉素 b 混合物）。
p/s青霉素-鏈霉素 （yj-15140-122）5 ml
注意：不要過(guò)濾完全培養(yǎng)基。
2）培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3）凍存液：90%血清，10%dmso，現(xiàn)用現(xiàn)配。
二．細(xì)胞處理：
1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：
將含有1ml細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6ml完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000rpm條件下離心3-5min，棄去上清液，完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。
2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法：
1.棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的pbs潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2.加入0.25％（w / v）胰蛋白酶-0.53 mm edta于培養(yǎng)瓶中（t25瓶1-2ml，t75瓶2-3ml），置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長(zhǎng)消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%fbs的培養(yǎng)基來(lái)終止消化。
3.輕輕打勻后吸出，在1000rpm條件下離心3-5min，棄去上清液，補(bǔ)加1-2ml培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新t25瓶中，添加6-8ml按照說(shuō)明書(shū)要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長(zhǎng)活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。
3）細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。
下面t25瓶為例；
1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過(guò)程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來(lái)決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.
2. 1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10^6~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱(chēng)、代數(shù)、日期等信息。
3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過(guò)夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。
注意事項(xiàng)
1.收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。
2.收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀(guān)察細(xì)胞生長(zhǎng)情況，并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀(guān)拍一張照片，觀(guān)察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀(guān)察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷(xiāo)售依據(jù)。
3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶(hù)收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶(hù)需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶(hù)提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。
4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請(qǐng)注意防護(hù)，所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。
5.客戶(hù)在細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，有技術(shù)問(wèn)題可以聯(lián)系咨詢(xún)技術(shù)售后，我們隨時(shí)給予解答。
從2011年開(kāi)始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)外包及論文潤(rùn)色服務(wù)，協(xié)助客戶(hù)各類(lèi)實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色十多年，是您值得信賴(lài)的科研合作伙伴!
如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究，歡迎您與我們聯(lián)系。
實(shí)驗(yàn)代做服務(wù)：
免疫組化ihc染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)
細(xì)胞、組織tunel凋亡染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)
試劑盒免費(fèi)代檢測(cè)
實(shí)驗(yàn)室代做實(shí)驗(yàn)項(xiàng)目
透射電鏡服務(wù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)
石蠟/冰凍切片tunel凋亡
核仁組成區(qū)嗜銀-agnor染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)
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rna結(jié)合蛋白免疫沉淀（rip）實(shí)驗(yàn)代做
酶聯(lián)免疫（elisa）技術(shù)服務(wù)
雞傳染性法氏囊病病毒vp2抗體診斷試劑盒
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染色質(zhì)免疫沉淀分析(clip)實(shí)驗(yàn)服務(wù)
多因子液相芯片技術(shù)（luminex）實(shí)驗(yàn)
免疫細(xì)胞化學(xué)icc實(shí)驗(yàn)服務(wù)
atp/adp檢測(cè)實(shí)驗(yàn)服務(wù)
蛋白雙向(2-d)電泳實(shí)驗(yàn)服務(wù)
蛋白相互作用分析
堿性磷酸酶染色實(shí)驗(yàn)服務(wù)
pkc活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
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（label-free）
dige技術(shù)實(shí)驗(yàn)服務(wù)
端粒酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
細(xì)胞生長(zhǎng)曲線(xiàn)的測(cè)定
掃描電鏡服務(wù)
nf-kb p65活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn)
慢病毒包裝實(shí)驗(yàn)服務(wù)