mrna cap 2′-o-甲基轉(zhuǎn)移酶（50u/μl）說明書
產(chǎn)品描述
mrna cap2氧甲基轉(zhuǎn)移酶（mrna cap 2′-o-methyltransferase）是一種來自于牛痘病毒的重組蛋白。該酶可以在rna的5′末端緊挨帽結(jié)構(gòu)的第一個(gè)核苷酸的2′-o位置處添加一個(gè)甲基基團(tuán)。該酶利用sam作為甲基供體來甲基化加帽rna，從而形成cap1結(jié)構(gòu)。cap1結(jié)構(gòu)能增強(qiáng)mrna的翻譯效率，因此可有助于改善mrna轉(zhuǎn)染和顯微注射實(shí)驗(yàn)中的表達(dá)。該酶需要有m7gpppn即7-甲基鳥苷帽結(jié)構(gòu)的rna作為底物。
產(chǎn)品性質(zhì)來源：攜帶牛痘病毒2'-o-甲基轉(zhuǎn)移酶基因的e. coli分子量：82 kda純度：≥95%比活：50 u/μl比活單位定義：在 37℃下1 h內(nèi)將10 pmol 80 nt 的帶帽rna轉(zhuǎn)錄物甲基化所需要的酶量定義為1個(gè)活性單位存儲(chǔ)緩沖液：20 mm tris-hcl，100 mm nacl，1 mm dtt，0.1 mm edta，0.1% tritonx-100，50%甘油，ph 8.0 產(chǎn)品組分
組分
產(chǎn)品編號(hào)/規(guī)格
78mrna-1106a
78mrna-1106b
78mrna-1106c
mrna cap 2′-o-methyltransferase (50 u/μl)
50 μl
200 μl
1 ml
10x capping reaction buffer
150 μl
500 μl
1.25x2 ml
sam (32 mm)
50 μl
200 μl
1 ml
rnase free water
1 ml
1 ml
1mlx3
產(chǎn)品應(yīng)用【uncapped rna 一步加帽法 】適用于10 μg以內(nèi) uncapped rna（≥100 nt）的加帽反應(yīng)，反應(yīng)體系20 μl，且可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要放大。1. 取10 μg rna，用rnase free water將適量rna稀釋至14 μl；2. 將rna置于65℃加熱5 min，結(jié)束后冰上放置5 min；3. 按照右側(cè)表格依次加入各組分；4. 37℃反應(yīng)60 min；5. rna加帽完成，可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
組分 體積
denatured uncapped rna 14 ul
10x capping buffer 2 ul
gtp (10 mm) 1 ul
sam (4 mm) 1 ul
vaccinia capping enzyme (10 u/μl) 1 ul
mrna cap 2'-o-methyltransferase (50 u/μl) 1 ul
total volume 20 ul
【 cap 0-rna 的甲基化反應(yīng) 】適用于10 μg以內(nèi) cap 0-rna（≥100 nt）的甲基化反應(yīng)，反應(yīng)體系20 μl，且可根據(jù)實(shí)驗(yàn)需要放大。1. 用rnase free water將適量rna稀釋至15 μl；2. 將rna置于65℃加熱5 min，結(jié)束后冰上放置5 min；3. 按照右側(cè)表格依次加入各組分；4. 37℃孵育60 min；5. rna加帽完成，可進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
組分 體積
denatured capped rna 15 ul
10x capping buffer 2 ul
gtp (10 mm) 1 ul
sam (4 mm) 1 ul
mrna cap 2'-o-methyltransferase (50 u/μl) 1 ul
total volume 20 ul
注意事項(xiàng)： （1）用于加帽反應(yīng)的rna在使用前應(yīng)進(jìn)行純化并溶解于rnase free water 。溶液中不能含有edta和鹽。（2）加帽酶反應(yīng)前加熱rna可以去除轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物5′的二級(jí)結(jié)構(gòu)。如果轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的5′端結(jié)構(gòu)復(fù)雜，可將加熱時(shí)間延長(zhǎng)至10 min。（3）如果轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的5′端結(jié)構(gòu)復(fù)雜，為提高加帽效率可將反應(yīng)時(shí)間延長(zhǎng)至120 min。（4）sam在室溫下會(huì)逐漸降解，sam降解會(huì)導(dǎo)致n 7 甲基化效率降低，會(huì)進(jìn)一步導(dǎo)致加帽失敗，因此需始終放置在冰上。此外，也可以通過體系優(yōu)化適當(dāng)提高用量以保證加帽反應(yīng)順利進(jìn)行。 其他用途可參考上述用途或相關(guān)文獻(xiàn)資料進(jìn)行實(shí)驗(yàn) 運(yùn)輸和保存方法
運(yùn)輸條件：藍(lán)冰/干冰運(yùn)輸
保存溫度：-20℃以下保存
避免反復(fù)凍融或頻繁暴露于溫度變化中，shou次使用時(shí)建議進(jìn)行分裝。
產(chǎn)品效期：12個(gè)月
注意事項(xiàng)
1. 使用時(shí)宜存放在冰盒內(nèi)或冰浴上，使用完畢后宜立即放置于-20℃保存；
2. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作；
3. 產(chǎn)品僅供研究使用
貨號(hào) 品名 規(guī)格 品牌
78mrna-1106a mrna cap 2′-o-甲基轉(zhuǎn)移酶（50u/μl） 2500 u biohub
78mrna-1106b mrna cap 2′-o-甲基轉(zhuǎn)移酶（50u/μl） 10000 u biohub
78mrna-1106c mrna cap 2′-o-甲基轉(zhuǎn)移酶（50u/μl） 50000 u biohub