高效液相色譜儀（hplc）現(xiàn)已成為有機(jī)化學(xué)分析的重要手段之一，已成為*的分析儀器。不管你買(mǎi)十幾萬(wàn)還是幾十萬(wàn)的液相，都與液相的操作有關(guān)，關(guān)于液相的操作注意事項(xiàng)，重要的有三點(diǎn)：脫氣、過(guò)濾和沖洗。
脫 氣
流動(dòng)相使用前必須進(jìn)行脫氣處理 ，以除去其中溶解的氣體（如o2），以防止在洗脫過(guò)程中當(dāng)流動(dòng)相由色譜柱流至檢測(cè)器時(shí)，因壓力降低而產(chǎn)生氣泡。氣泡會(huì)增加基線的噪音，造成靈敏度下降，甚至無(wú)法分析。溶解的氧氣還會(huì)導(dǎo)致樣品中某些組份被氧化，柱中固定相發(fā)生降解而改變柱的分離性能。若用fld，可能會(huì)造成熒光猝滅。常用的脫氣方法有如下幾種：
1.吹氦脫氣法：
利用液體中氦氣的溶解度比空氣低的特性，采用一個(gè)高效分布式噴射流裝置，一體積的氦氣可從流動(dòng)相中將等體積的幾乎全部氣體排除。這意味著1l氦氣通過(guò)1l流動(dòng)相就可完成排氣這個(gè)工作。這種脫氣方法雖然好，但我們國(guó)內(nèi)氦氣價(jià)格較高，很少有實(shí)驗(yàn)室采用此方法。
2.加熱回流法：
此法的脫氣效果較好。在操作時(shí)要注意冷凝塔的冷卻效率，否則溶劑會(huì)丟失，混合流動(dòng)相的比例會(huì)有變化。
3.抽真空脫氣法：
此法可使用真空泵，降壓至0.05～0.07mpa 即可除去溶解的氣體。但是由于真空脫氣會(huì)使混合溶劑組成發(fā)生變化，從而影響到實(shí)驗(yàn)的重現(xiàn)性，因此多用于單溶劑體系的簡(jiǎn)單分析。
4.超聲波脫氣法：
將欲脫氣的流動(dòng)相置于*中，用超聲波震蕩10～20min。此法的脫氣效果差。
5.在線脫氣法：
現(xiàn)在商品的hplc 儀器，均可配在線脫氣機(jī)。在線脫氣使用簡(jiǎn)單，低故障，有效。建議購(gòu)買(mǎi)儀器時(shí)一定要購(gòu)買(mǎi)，有的公司是作為選購(gòu)件，所以與儀器公司談配置時(shí)應(yīng)與公司確認(rèn)。
過(guò) 濾
任何顆粒物進(jìn)入hplc系統(tǒng)后都會(huì)在柱子入口端被篩板擋住，所造成的結(jié)果是將柱子堵塞，表現(xiàn)出的特征是系統(tǒng)壓力增加并使色譜峰變形。因此，要采取各種預(yù)防措施，包括操作步驟和商品儀器自身的各種過(guò)濾設(shè)計(jì)，努力防止或減少顆粒物進(jìn)入hplc系統(tǒng)中，從而延長(zhǎng)儀器和色譜柱的使用壽命，并提高數(shù)據(jù)的可靠性。在hplc系統(tǒng)中，顆粒物的主要來(lái)源有三個(gè)途徑：流動(dòng)相、被測(cè)樣品和儀器系統(tǒng)部件的磨損物。
1.流動(dòng)相
如果流動(dòng)相均由高效液相色譜級(jí)溶劑組成，流動(dòng)相沒(méi)有必要過(guò)濾。這是因?yàn)楦咝б合嗌V級(jí)的有機(jī)溶劑，例如乙腈、甲醇等，在制造的工藝過(guò)程中都已經(jīng)過(guò)了0.2μm微孔濾膜過(guò)濾。然而，如果有任何一種緩沖液中加入了固體物，例如，磷酸鹽，流動(dòng)相過(guò)濾將是必要的一個(gè)步驟。雖然緩沖鹽可能是可溶解的、高純的，但它還是可能含有顆粒物質(zhì)。因此，流動(dòng)相制備僅采用hplc級(jí)液體時(shí)不需要過(guò)濾，反之所有流動(dòng)相組成在使用前必須過(guò)濾。
2.被測(cè)樣品
液相系統(tǒng)中的第二個(gè)顆粒物來(lái)源是被測(cè)樣品。你使用了針筒式過(guò)濾器就不可能100%得到通過(guò)過(guò)濾器的被測(cè)樣品，總會(huì)有或多或少的丟失。丟失來(lái)自這樣幾方面：過(guò)濾器濾膜的吸附、過(guò)濾器濾出的顆粒物上的吸附、針筒式濾膜過(guò)濾器與針筒連接處的滲漏等。所以過(guò)濾這步已成為*的一步。在實(shí)際分析工作中，一般檢測(cè)每一組樣品會(huì)帶一個(gè)外標(biāo)、一個(gè)添加回收或是質(zhì)控樣品，所以，只要終檢測(cè)時(shí)得到的信噪比能滿(mǎn)足檢出限要求，可將這步視為系統(tǒng)誤差而忽略。
3.儀器系統(tǒng)部件的磨損物
后，在hplc系統(tǒng)中顆粒物的另一個(gè)主要來(lái)源是*密封墊和進(jìn)樣閥旋轉(zhuǎn)軸的磨損。關(guān)于*密封墊的磨損更換有兩種不同建議。一種建議認(rèn)為建議半年或一年更換這些密封墊，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)基于上述觀點(diǎn)制定定期預(yù)防性維護(hù)計(jì)劃。另一種建議則認(rèn)為，只要不漏液就不要輕易更換密封墊。兩種說(shuō)法都有其道理，具體如何操作，建議與儀器公司工程師溝通，各公司的儀器還是有些不同的。
沖 洗
使hplc系統(tǒng)良好運(yùn)行的第三個(gè)要點(diǎn)是保持系統(tǒng)的清潔。你需要關(guān)注流動(dòng)相流經(jīng)該系統(tǒng)的所有地方，對(duì)于這些地方經(jīng)常性的沖洗，將使你的系統(tǒng)保持在“ready”狀態(tài)：
1.流動(dòng)相儲(chǔ)液瓶
首先要經(jīng)常清洗流動(dòng)相儲(chǔ)液瓶，或者每做一批新樣品更換一次流動(dòng)相。一個(gè)臟的儲(chǔ)液瓶將會(huì)污染注入的流動(dòng)相。建議儲(chǔ)液瓶中緩沖液使用時(shí)間不要超過(guò)一周，而有機(jī)溶劑使用時(shí)間不要超過(guò)一個(gè)月。儀器公司的工程師建議儲(chǔ)水瓶的水要天天換，每周瓶子還應(yīng)該用異丙醇清洗一次。有的實(shí)驗(yàn)室則在水里加入0.1～1 mm的甲酸抑制微生物的生長(zhǎng)。
2.泵
接下來(lái)要沖洗的是泵。千萬(wàn)不要一分析完沖幾分鐘后就停泵，特別是當(dāng)流動(dòng)相中含有難揮發(fā)的緩沖液（如磷酸鹽）時(shí)。如果儀器不是連續(xù)使用，當(dāng)流動(dòng)相蒸發(fā)時(shí)，難揮發(fā)物就會(huì)粘在活塞密封墊的表面，難揮發(fā)物將形成固形物沉淀。這是泵密封墊磨損和單向閥滲漏的主要原因之一。所以，無(wú)論使用長(zhǎng)短，在停泵以前一定要用非緩沖液流動(dòng)相沖洗泵在半個(gè)小時(shí)以上，要是流動(dòng)相中有難揮發(fā)緩沖鹽則建議沖洗的時(shí)間應(yīng)該更長(zhǎng)些。
3.自動(dòng)進(jìn)樣器
自動(dòng)進(jìn)樣器也要按規(guī)定清洗。現(xiàn)在的儀器多配有自動(dòng)進(jìn)樣器的沖洗液瓶，通常只要注意及時(shí)更換、補(bǔ)充沖洗液即可。自動(dòng)進(jìn)樣器用的洗滌液也要采用與流動(dòng)相相同的方式處理，并根據(jù)溶劑的有效期和規(guī)定，清洗儲(chǔ)液瓶或更換洗滌液。現(xiàn)在的自動(dòng)進(jìn)樣器設(shè)置、操作都很簡(jiǎn)單，如果時(shí)間允許（特別是利用夜間運(yùn)行），每次分析完后設(shè)置進(jìn)1、2針純?nèi)軇ㄈ缂状?、乙腈），也是一個(gè)好做法。
4.色譜柱
對(duì)柱子的污染是隨使用時(shí)間而增加。通常表現(xiàn)是：運(yùn)行走基線時(shí)在記錄的色譜圖中基線噪音增加，泵壓也增加。解決這個(gè)問(wèn)題的有效方法就是在每一批樣品分析結(jié)束后或準(zhǔn)備卸下柱子時(shí)用大量的流動(dòng)相沖洗柱子（例如甲醇、乙腈和水）。用梯度沖洗效果更好，具體的比例要根據(jù)柱子的說(shuō)明書(shū)和性質(zhì)而定。
5.檢測(cè)器
如果是正常使用，檢測(cè)器將依據(jù)其性質(zhì)并按照說(shuō)明書(shū)規(guī)定進(jìn)行洗。例如uv/vis檢測(cè)器或fl檢測(cè)器，在對(duì)柱子和系統(tǒng)進(jìn)行沖洗時(shí)也就一同對(duì)檢測(cè)器流通池中污染物進(jìn)行了清洗。但是蒸發(fā)光檢測(cè)器或質(zhì)譜儀則需要按照說(shuō)明書(shū)進(jìn)行定期清洗。因而，需要定期清洗。而且對(duì)連有這些檢測(cè)器的系統(tǒng)沖洗時(shí)，要將與這些檢測(cè)器斷開(kāi)，以減少對(duì)檢測(cè)器的污染。
總之，實(shí)驗(yàn)室日常使用的液相色譜儀要是能認(rèn)真做好這三項(xiàng)工作——脫氣、過(guò)濾和沖洗，你的儀器可以得到良好的預(yù)防性維護(hù)，使用時(shí)就會(huì)感到比較順手。當(dāng)然，在實(shí)際操作時(shí)遇到的問(wèn)題并沒(méi)有這么簡(jiǎn)單，但這三個(gè)良好習(xí)慣將是正確操作、使用hplc系統(tǒng)的基礎(chǔ)。