1 適用范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了奶及奶制品中雌三醇?xì)埩袅康臏y(cè)定方法（本實(shí)驗(yàn)樣品為牛奶）。
參考標(biāo)準(zhǔn)：《gb29698-2013食品安q標(biāo)準(zhǔn)奶及奶制品中17β-雌二醇、雌三醇、*多殘留的測(cè)定氣相色譜-質(zhì)譜法》
2 提取步驟
準(zhǔn)確稱取10g試樣（j確至0.01g）于50ml離心管中，加入5ml乙腈、15ml乙酸乙酯，渦旋3min，以8000r/min離心5min，吸取上清液于50ml雞心瓶中，殘?jiān)貜?fù)上述步驟重復(fù)提取一次，合并提取液。于40℃下濃縮至近干，用1mol/lnaoh溶液6ml分三次溶解，轉(zhuǎn)至另一50ml離心管中，加20ml正己烷渦旋振蕩1min，以8000r/min離心3min，收集下層提取液，用5mol/l鹽酸溶液調(diào)ph至5.0-5.2，備用。
3 凈化步驟
spe柱：月旭welchromc18小柱，規(guī)格：500mg/6ml。
活化平衡：5ml甲醇，5ml水；
上樣：將備用液全部上樣，棄去；
淋洗：5ml水，棄去并壓干；
洗脫：5ml甲醇，收集并壓干。
收集洗脫液于40℃氮吹至干，用5ml95%正己烷-乙酸乙酯溶液溶解殘余物，待凈化。
spe柱：月旭welchromsilica小柱，規(guī)格：500mg/6ml。
活化平衡：5ml正己烷；
上樣：將待凈化液全部上樣，棄去；
淋洗：5ml正己烷，棄去并壓干；
洗脫：5ml70%正己烷-乙酸乙酯溶液，收集于具塞玻璃試管中并壓干。
4 衍生化
將上述洗脫液于40℃氮吹至干，加入30μl七氟丁酸酐、70μl丙酮蓋緊蓋子，渦旋混合30s，于30℃恒溫箱中衍生30min，氮吹至干，準(zhǔn)確加入1ml正己烷，渦旋混合10s，溶解殘余物，供gc-ms分析。
5 色譜條件
氣相色譜條件
色譜柱：wm-5ms,30m×0.25mm×0.25μm；
進(jìn)樣口溫度：250℃；
升溫程序：120℃，保持2min，以15℃/min升溫至250℃，再以5℃/min升溫至300℃，保持5min；
載氣：高純氦氣（純度>99.999%）；
進(jìn)樣方式：不分流進(jìn)樣；
恒流模式：1.0ml/min；
進(jìn)樣量：1μl。
質(zhì)譜條件
電離方式：電子轟擊電離源（ei）；
電離能量：70ev；
傳輸線溫度：280℃；
離子源溫度：230℃；
四極桿溫度：150℃；
監(jiān)測(cè)方式：449.1/409.1/356.1；
溶劑延遲：5min。
6 色譜圖或者加標(biāo)回收率結(jié)果
7相關(guān)產(chǎn)品信息