每一盒elisa試劑盒試劑盒里面都有一份對應的說明書,而每一份說明書里都會有寫樣本和稀釋液的稀釋份額,為何樣本都需求稀釋呢?今日的文章中,公司將為您剖析:為何elisa實驗血清樣本都需求稀釋?
在elisa試劑盒實驗血清為何要稀釋?有兩個原因:
1.比賽按捺對比明顯,應稀釋比賽物;
2.以下降非特異性反應,使特異性的抗原抗體反應充分體現(xiàn)出來。
血清稀釋用一般的pbs即可,可加1%的bsa,能有用下降elisa本底,當然假如你嫌費事我覺得用生理鹽水代替pbs也不大。不管你是用直接比賽仍是直接比賽,血清的稀釋倍數(shù)必定要事前確認,但也不必一點點,你做一個預實驗即可,挑選od在1.0左右的稀釋倍數(shù),即你的elisa中陰性孔od在1.0,這么作出來的曲線對比靈敏。
elisa試劑盒實驗稀釋血清的過程:
1、先把蛋白稀釋一定的倍數(shù),比如說10倍、20倍稀釋(這樣可以大體確認一個參數(shù)),將抗原進行一系列稀釋包被微量反應板。
2、再用一定稀釋度的陽性參閱血清和陰性參閱血清進行孵育后洗刷,再加酶結合物進行反應,經(jīng)孵育洗刷后,加底物溶液顯色,停止反應后分別測定o.d值,挑選o.d值≥1.0的那個抗原稀釋度為適包被濃度。一般總是要挑選那個o.d值稍大于1.0,而不挑選小于1.0的抗原濃度。陰性參閱血清o.d值要求<0.1-0.2。也便是要求陽性參閱血清和陰性參閱血清的o.d值有明顯差別。