一、各種蛋白染色方法的靈敏度比較
二、考馬斯亮藍(lán)染色
cbb染色液
0.5%考馬斯亮藍(lán)g250 或r250
40%甲醇
10%乙酸
將cbb溶于甲醇中并不停的攪拌15min。加入乙酸與 ddh2o脫色液：30%甲醇
10%乙酸
染色方法：1.在搖床上染色30min.
2.脫色至蛋白點(diǎn)或條帶清晰可見
3. ddh2o洗3-5次
三、膠體考馬氏亮藍(lán)染色colloidalcoomassiestaining（cambridgecentreforporteomics ）
sensitivity= ~100ng
1.固定：甲醇/醋酸/h2o(45:1:54)至少20min.
2.染色12-18hr。
染色液：17% (w/v)硫酸銨
34%甲醇
0.5%醋酸
0.1% (w/v)coomassieg250
3. 脫色：用h2o 脫色至蛋白點(diǎn)和背景清晰.
雙向電泳蛋白點(diǎn)的切取和保存
1. 用pdquest軟件或肉眼比對，找出感興趣的蛋白點(diǎn)，并做好標(biāo)記和記錄。
2. 用milliq 水沖洗膠2次。
3. 用色譜純甲醇和milliq 水沖洗ep 管
4. 將槍頭(200µl)下端剪去，使其內(nèi)徑略小于蛋白斑點(diǎn)的直徑，用色譜純甲醇和milliq水沖洗槍頭。
5. 對準(zhǔn)斑點(diǎn)中央小心將蛋白切割下來，放入ep管，milliq水漂洗2次，如膠塊太大，將其切成1 x1 mm的膠片。
6. 將切好的點(diǎn)做好標(biāo)記和記錄，置-80oc 保存或凍干后-20oc 存放。
注意事項(xiàng)：
1. 盡量避免皮膚和頭發(fā)的角蛋白的污染，在操作過程中應(yīng)戴一次性的pe 手套（不用乳膠手套）和帽子。
2. 不要將膠長期存放于乙酸溶液中。
3. ep管及染膠的容器必須用甲醇和水充分清洗，尤其應(yīng)與進(jìn)行western blotting的容器分開，以避免casein 或bsa的污染。