四種常見(jiàn)的elisa方法您知道多少
四種常見(jiàn)elisa方法
1.直接elisa
將抗原固定于elisa板上，然后用酶標(biāo)抗體直檢測(cè)抗原。
相較于其它類(lèi)型的elisa實(shí)驗(yàn)，直接elisa實(shí)驗(yàn)步驟少，檢測(cè)速度快，不需要用到二抗，避免了交叉反應(yīng)，測(cè)定結(jié)果不容易出錯(cuò)。但是由于直接elisa的抗原不是特異性固定的，樣本中的靶蛋白及其他雜質(zhì)蛋白都會(huì)與elisa板結(jié)合，實(shí)驗(yàn)背景會(huì)比較高。而且直接elisa每種靶蛋白都需要準(zhǔn)備能夠與其特異性結(jié)合的一抗，實(shí)驗(yàn)不太靈活。另外由于沒(méi)有使用二抗，信號(hào)沒(méi)有被放大，降低了測(cè)定的靈敏度。
2.間接elisa
先將抗原結(jié)合到elisa板上，隨后分兩步進(jìn)行檢測(cè)：首先加入檢測(cè)抗體與抗原特異性結(jié)合，隨后加入酶標(biāo)二抗檢測(cè)并利用底物顯色。
與直接elisa相比，間接elisa用到酶標(biāo)二抗，具有更高的靈敏度，也需要更少的標(biāo)記抗體，更經(jīng)濟(jì)。間接elisa還提供了更大的靈活性，因?yàn)椴煌囊豢鼓軌蚺c單一標(biāo)記的二抗一同使用。間接elisa實(shí)驗(yàn)的缺點(diǎn)是存在交叉反應(yīng)的可能性（酶標(biāo)二抗直接與抗原結(jié)合），可能會(huì)增加背景，同時(shí)與直接elisa相比，間接elisa實(shí)驗(yàn)多了二抗孵育的步驟，實(shí)驗(yàn)周期延長(zhǎng)。
3.夾心elisa
先將捕獲抗體固定于elisa板孔中，然后加入樣品，接著加入檢測(cè)抗體。如果檢測(cè)抗體是酶標(biāo)抗體，則可稱(chēng)為直接夾心elisa；如果檢測(cè)抗體不帶有標(biāo)記，則還需要使用酶標(biāo)二抗與檢測(cè)抗體結(jié)合，這種稱(chēng)為間接夾心elisa。
夾心elisa的靈敏度高，它比直接或間接elisa敏感2-5倍；同時(shí)夾心elisa使用兩種特異性抗體與抗原結(jié)合，擁有很高的特異性。另外夾心elisa能夠通過(guò)直接或間接的方式進(jìn)行檢測(cè)，靈活性較高。夾心elisa的缺點(diǎn)是對(duì)配對(duì)抗體要求很高，如果沒(méi)有標(biāo)準(zhǔn)化的試劑盒或者已經(jīng)通過(guò)測(cè)試的配對(duì)抗體，則需要進(jìn)行配對(duì)抗體定制并進(jìn)行優(yōu)化，因?yàn)榻档筒东@抗體與檢測(cè)抗體之間的交叉反應(yīng)是非常重要的。
4.競(jìng)爭(zhēng)elisa法
預(yù)先將抗原包被在固相載體上，并加入酶標(biāo)記的特異性抗體。實(shí)驗(yàn)時(shí)，加入待檢抗原（或抗體），如果待檢物是抗原，則待檢抗原與預(yù)先包被在固相載體上的抗原競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合酶標(biāo)抗體；如果待檢測(cè)物是抗體，則待檢抗體就與系統(tǒng)中原有的酶標(biāo)抗體競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合包被在固相載體上的抗原。通過(guò)洗滌洗掉被競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合的酶標(biāo)抗體，最后加底物顯色。需要注意的是顯色結(jié)果與待檢抗原（或抗體）的量成反比。
競(jìng)爭(zhēng)elisa相對(duì)以上介紹的三種方法更復(fù)雜一些，但以上三種elisa類(lèi)型都適用于競(jìng)爭(zhēng)elisa的形式。其主要優(yōu)點(diǎn)在于可檢測(cè)不純的樣品，且數(shù)據(jù)再現(xiàn)性高，但存在整體敏感性和專(zhuān)一性較差的問(wèn)題。
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