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        狐貍降鈣素ELISA檢測試劑盒操作步驟

        發(fā)布時(shí)間:2024-08-11
        狐貍降鈣素elisa檢測試劑盒操作步驟:
        . 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔0孔,在di一、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品00μl,然后在di一、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后從di一孔、第二孔中各取00μl分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉,再各取50μl分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各取50μl分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液50μl,混勻后從第九第十孔中各取50μl棄掉。(稀釋后各孔加樣量都為50μl,濃度分別為80 ng/l,20 ng/l ,60 ng/l,30 ng/,5 ng/l)。
        2. 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品0μl(樣品最終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
        3. 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
        4. 配液:將30(48t的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48t的20倍)倍稀釋后備用。
        5. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
        6. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。
        7. 溫育:操作同3。
        8. 洗滌:操作同5。
        9. 顯色:每孔先加入顯色劑a50μl,再加入顯色劑b50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色5分鐘.
        0. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
        . 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(od值)。 測定應(yīng)在加終止液后5分鐘。
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